Микробиология и генетика

МИКРОБИОЛОГИЯ И ГЕНЕТИКАЗадание 1. Приготовить и проанализировать препараты из двух известных кисломолочных продуктов. (мах.10 баллов)Оборудование: Микроскопы, горелки или спиртовки, предметные стекла, пипетки, микробиологические петли, полоски фильтровальной бумаги, краситель метиленовый синий, иммерсионное масло, колба или стаканчик с водопроводной водой. 2 известных кисломолочных продукта.Ход работы:1. С помощью стерильной пипетки и/или петли, простерилизованной в пламени горелки, приготовить...
Раздел Биология
Класс -
Тип Другие методич. материалы
Автор
Дата
Формат doc
Изображения Есть
For-Teacher.ru - все для учителя
Поделитесь с коллегами:

Пример задания 1

Определение проницаемости мембраны дрожжей для ионов.

Живая клетка окружена барьером (мембраной), который является избирательным для различных типов веществ, могущих проникнуть в клетку. Предлагаемый эксперимент предназначен для демонстрации проницаемости мембраны клеток дрожжей для различных ионов.

1. Растворите 4 г сухих дрожжей в 50 мл 0,5%-ного Na2CO3 и тщательно взболтайте.

2. Пометьте номерами пять пробирок. В каждую добавьте по 5 мл полученного раствора и по 1 мл 0,02%-ного нейтрального красного. Перемешайте.

3. Поместите пробирку 2 на 5 мин в водяную баню с кипящей водой. (Отдайте вашу пробирку лаборанту, который проведет эту процедуру.)

4. Поместите пробирки 1 и 2 на 5 мин в центрифугу и пронаблюдайте за цветом вещества, плавающего на поверхности (супернатант), и осадка. Пробирки 1 и 2 лаборант центрифугирует. Потом продолжайте опыт: согласно инструкции... пронаблюдайте окраску....

5. Добавьте 1 мл 0,02%-ного NaOH в пробирку 4 и 1 мл 0,02%-ного NH4OH в пробирку 5. Тщательно смешайте и пронаблюдайте цвет суспензии дрожжей.

6. Запишите результаты исследований в таблицу и ответьте на предлагаемые вопросы.

Примечание. Для определения цвета красителя при разных рН получите стандартный кислый раствор.

Микробиология и генетика

Вопросы

Обведите кружком букву правильного ответа на каждый вопрос.

1. Цвет супернатанта в пробирке 1:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

2. Цвет осадка в пробирке 1:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

3. Цвет осадка в пробирке 2:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

4. Цвет осадка в пробирке 3:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

5. Каково действие кипячения на рН супернатанта:

а - не оказывает действия;
б - раствор становится более кислым;
в - раствор становится более щелочным.

6. В пробирке 1 клетки дрожжей являются:

а - жизнеспособными;
б - нежизнеспособными;
в - окрашенными.

7. В пробирке 2 клетки дрожжей являются:

а - жизнеспособными;
б - нежизнеспособными;
в - окрашенными.

8. В пробирке 1 рН клеток дрожжей соответствует среде:

а - нейтральной;
б - кислой;
в - щелочной.

9. В пробирке 2 рН клеток дрожжей соответствует среде:

а - нейтральной;
б - кислой;
в - щелочной.

10. В пробирке 2 действие кипячения на клетки дрожжей привело к:

а - гибели клеток;
б - проникновению в клетки ионов Na+;
в - обесцвечиванию клеток.

11. Цвет суспензии в пробирке 3:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

12. Цвет суспензии в пробирке 4:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

13. По результатам эксперимента в пробирке 4 можно заключить, что:

а - мембрана клеток дрожжей непроницаема как для ионов Na+, так и для ионов ОН-;
б - ионы ОН- могут проникать в клетки дрожжей и могут быть нейтрализованы ионами водорода внутри клеток;
в - только ионы Na+ могут проникать в клетку; г - NaOH является слабощелочным.

14. Цвет суспензии в пробирке 5:

а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.

15. Результат эксперимента в пробирке 5 означает, что:

a - NH4OH повышает проницаемость мембраны клеток дрожжей для ионов гидроксила;
б - проницаемость мембраны клеток дрожжей для иона NH4+ отличается от проницаемости ионов Na+;
в - NH4OH обесцвечивает клетки;
г - ионы NH4+ входят в клетку взамен ионов водорода.

16. Допустим, что 1 мл 0,02 М уксусной кислоты добавлен в пробирку № ___ и окраска клеток суспензии вернулась к начальному цвету. Можно заключить, что:

а - уксусная кислота может проникнуть в клетки дрожжей и изменить рН внутри клеток;
б - ионы ацетата проникают в клетки дрожжей, заменяя ионы ОН-;
в - уксусная кислота убивает клетки дрожжей, и поэтому происходят изменения рН;
г - уксусная кислота заставляет ионы водорода проникать в клетки дрожжей;
д - ионы ацетата проникают в клетки дрожжей, заменяя ионы NH4.

Пример задания 2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФАТА ПО МЕТОДУ ФИСКЕ-СУББАРОУ В МОДИФИКАЦИИ ХЕРСА И РАСЧЕТ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ

Для определения неорганического фосфата Вам предоставляются следующие реактивы:

  1. Стандартный раствор неорганического фосфата с концентрацией 62 мкг/мл (в расчете на Р).

  2. Молибденовый реактив - (NН4)2MoO4, 1,25% в 2,5 Н серной кислоте (будьте аккуратны и осторожны при работе с кислотой !!!)

  3. Рабочий раствор эйконогена (-1,2,4-аминонафтолсульфоновой кислоты).

  4. 6 пустых пробирок в штативе для стандартного ряда фосфата.

  5. Две пробирки 1х и 2х (пробы 7 и 8), которые содержат по 1 мл раствора глюкозо-6-фосфата с одинаковой концентрацией, в который либо не был (пробирка 1х), либо был добавлен (пробирка 2х) раствор фермента щелочной фосфатазы (отщепляет неорганический фосфат от глюкозо-6-фосфата) до конечной концентрации 20 мкг/мл. Пробирка 2х инкубировалась 10 мин при 25С, после чего реакция была остановлена.

Ход определения: К исследуемому раствору, содержащему неорганический фосфат (пробы 1-8), приливают дистиллированную воду до 2,2 мл, добавляют 0,25 мл молибденового реактива и 0,1 мл раствора эйконогена. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 5-10 мин при комнатной температуре. Следят за развитием окраски.

Задание 1 (25 баллов). Впишите в прилагаемую Таблицу те объемы растворов, которые Вы будете добавлять, и заполните пробы:

№ пробы

Станд. раствор

фосфата, мкг

Станд. раствор

фосфата, мл

Проба 1х, мл

Проба 2х, мл

Н2О, мл

(до 2,2 мл)

(NН4)2MoO4, мл

Эйко-ноген,

мл

*

1

0


-

-





2

12,4


-

-





3

24,8


-

-





4

37,2


-

-





5

49,6


-

-





6

62


-

-





7

-

-

1,0 мл

-





8

-

-

-

1,0 мл





Оставьте пробирки на столе на 5-10 мин.

Задание 2 (10 баллов). Пока развивается окраска, рассчитайте, какова молярная концентрация стандартного раствора фосфата.

После развития окраски сравните пробирки 1х и 2х (пробы 7 и 8) с пробирками из стандартного ряда (пробирки 1-6) и определите в них содержание неорганического фосфата. Поставьте знак «плюс» в последнем столбце (*) Таблицы напротив тех проб стандартного ряда, с которыми совпадает окраска проб 1х и 2х и впишите в этот столбец содержание фосфата в пробах 7 и 8.

Рассчитайте активность фермента щелочной фосфатазы, выразив её в международных единицах активности ферментов (мкмоль/мин на 1 мг белка).

Молярная концентрация стандартного раствора фосфата

Активность фермента щелочной фосфатазы


Задание 3 (5 балов). На чем основан используемый Вами метод определения содержания неорганического фосфата? Какие еще методы определения фосфата Вы знаете? Какие вещества могут использоваться вместо эйконогена при измерении неорганического фосфата?


Закончив работу, штативы и заполненные листы ответов оставьте на рабочем месте и позовите преподавателя, который примет Вашу работу.

Все расчеты производить только на обратной стороне листов ответа!

© 2010-2022