- Преподавателю
- Биология
- Микробиология и генетика
Микробиология и генетика
Раздел | Биология |
Класс | - |
Тип | Другие методич. материалы |
Автор | Мынжасарова Г.И. |
Дата | 08.04.2014 |
Формат | doc |
Изображения | Есть |
Пример задания 1
Определение проницаемости мембраны дрожжей для ионов.
Живая клетка окружена барьером (мембраной), который является избирательным для различных типов веществ, могущих проникнуть в клетку. Предлагаемый эксперимент предназначен для демонстрации проницаемости мембраны клеток дрожжей для различных ионов.
1. Растворите 4 г сухих дрожжей в 50 мл 0,5%-ного Na2CO3 и тщательно взболтайте.
2. Пометьте номерами пять пробирок. В каждую добавьте по 5 мл полученного раствора и по 1 мл 0,02%-ного нейтрального красного. Перемешайте.
3. Поместите пробирку 2 на 5 мин в водяную баню с кипящей водой. (Отдайте вашу пробирку лаборанту, который проведет эту процедуру.)
4. Поместите пробирки 1 и 2 на 5 мин в центрифугу и пронаблюдайте за цветом вещества, плавающего на поверхности (супернатант), и осадка. Пробирки 1 и 2 лаборант центрифугирует. Потом продолжайте опыт: согласно инструкции... пронаблюдайте окраску....
5. Добавьте 1 мл 0,02%-ного NaOH в пробирку 4 и 1 мл 0,02%-ного NH4OH в пробирку 5. Тщательно смешайте и пронаблюдайте цвет суспензии дрожжей.
6. Запишите результаты исследований в таблицу и ответьте на предлагаемые вопросы.
Примечание. Для определения цвета красителя при разных рН получите стандартный кислый раствор.
Вопросы
Обведите кружком букву правильного ответа на каждый вопрос.
1. Цвет супернатанта в пробирке 1:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
2. Цвет осадка в пробирке 1:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
3. Цвет осадка в пробирке 2:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
4. Цвет осадка в пробирке 3:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
5. Каково действие кипячения на рН супернатанта:
а - не оказывает действия;
б - раствор становится более кислым;
в - раствор становится более щелочным.
6. В пробирке 1 клетки дрожжей являются:
а - жизнеспособными;
б - нежизнеспособными;
в - окрашенными.
7. В пробирке 2 клетки дрожжей являются:
а - жизнеспособными;
б - нежизнеспособными;
в - окрашенными.
8. В пробирке 1 рН клеток дрожжей соответствует среде:
а - нейтральной;
б - кислой;
в - щелочной.
9. В пробирке 2 рН клеток дрожжей соответствует среде:
а - нейтральной;
б - кислой;
в - щелочной.
10. В пробирке 2 действие кипячения на клетки дрожжей привело к:
а - гибели клеток;
б - проникновению в клетки ионов Na+;
в - обесцвечиванию клеток.
11. Цвет суспензии в пробирке 3:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
12. Цвет суспензии в пробирке 4:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
13. По результатам эксперимента в пробирке 4 можно заключить, что:
а - мембрана клеток дрожжей непроницаема как для ионов Na+, так и для ионов ОН-;
б - ионы ОН- могут проникать в клетки дрожжей и могут быть нейтрализованы ионами водорода внутри клеток;
в - только ионы Na+ могут проникать в клетку; г - NaOH является слабощелочным.
14. Цвет суспензии в пробирке 5:
а - желтый;
б - розовый;
в - синий;
г - зеленый.
15. Результат эксперимента в пробирке 5 означает, что:
a - NH4OH повышает проницаемость мембраны клеток дрожжей для ионов гидроксила;
б - проницаемость мембраны клеток дрожжей для иона NH4+ отличается от проницаемости ионов Na+;
в - NH4OH обесцвечивает клетки;
г - ионы NH4+ входят в клетку взамен ионов водорода.
16. Допустим, что 1 мл 0,02 М уксусной кислоты добавлен в пробирку № ___ и окраска клеток суспензии вернулась к начальному цвету. Можно заключить, что:
а - уксусная кислота может проникнуть в клетки дрожжей и изменить рН внутри клеток;
б - ионы ацетата проникают в клетки дрожжей, заменяя ионы ОН-;
в - уксусная кислота убивает клетки дрожжей, и поэтому происходят изменения рН;
г - уксусная кислота заставляет ионы водорода проникать в клетки дрожжей;
д - ионы ацетата проникают в клетки дрожжей, заменяя ионы NH4.
Пример задания 2
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФАТА ПО МЕТОДУ ФИСКЕ-СУББАРОУ В МОДИФИКАЦИИ ХЕРСА И РАСЧЕТ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ
Для определения неорганического фосфата Вам предоставляются следующие реактивы:
-
Стандартный раствор неорганического фосфата с концентрацией 62 мкг/мл (в расчете на Р).
-
Молибденовый реактив - (NН4)2MoO4, 1,25% в 2,5 Н серной кислоте (будьте аккуратны и осторожны при работе с кислотой !!!)
-
Рабочий раствор эйконогена (-1,2,4-аминонафтолсульфоновой кислоты).
-
6 пустых пробирок в штативе для стандартного ряда фосфата.
-
Две пробирки 1х и 2х (пробы 7 и 8), которые содержат по 1 мл раствора глюкозо-6-фосфата с одинаковой концентрацией, в который либо не был (пробирка 1х), либо был добавлен (пробирка 2х) раствор фермента щелочной фосфатазы (отщепляет неорганический фосфат от глюкозо-6-фосфата) до конечной концентрации 20 мкг/мл. Пробирка 2х инкубировалась 10 мин при 25С, после чего реакция была остановлена.
Ход определения: К исследуемому раствору, содержащему неорганический фосфат (пробы 1-8), приливают дистиллированную воду до 2,2 мл, добавляют 0,25 мл молибденового реактива и 0,1 мл раствора эйконогена. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 5-10 мин при комнатной температуре. Следят за развитием окраски.
Задание 1 (25 баллов). Впишите в прилагаемую Таблицу те объемы растворов, которые Вы будете добавлять, и заполните пробы:
№ пробы
Станд. раствор
фосфата, мкг
Станд. раствор
фосфата, мл
Проба 1х, мл
Проба 2х, мл
Н2О, мл
(до 2,2 мл)
(NН4)2MoO4, мл
Эйко-ноген,
мл
*
1
0
-
-
2
12,4
-
-
3
24,8
-
-
4
37,2
-
-
5
49,6
-
-
6
62
-
-
7
-
-
1,0 мл
-
8
-
-
-
1,0 мл
Оставьте пробирки на столе на 5-10 мин.
Задание 2 (10 баллов). Пока развивается окраска, рассчитайте, какова молярная концентрация стандартного раствора фосфата.
После развития окраски сравните пробирки 1х и 2х (пробы 7 и 8) с пробирками из стандартного ряда (пробирки 1-6) и определите в них содержание неорганического фосфата. Поставьте знак «плюс» в последнем столбце (*) Таблицы напротив тех проб стандартного ряда, с которыми совпадает окраска проб 1х и 2х и впишите в этот столбец содержание фосфата в пробах 7 и 8.
Рассчитайте активность фермента щелочной фосфатазы, выразив её в международных единицах активности ферментов (мкмоль/мин на 1 мг белка).
Молярная концентрация стандартного раствора фосфата
Активность фермента щелочной фосфатазы
Задание 3 (5 балов). На чем основан используемый Вами метод определения содержания неорганического фосфата? Какие еще методы определения фосфата Вы знаете? Какие вещества могут использоваться вместо эйконогена при измерении неорганического фосфата?
Закончив работу, штативы и заполненные листы ответов оставьте на рабочем месте и позовите преподавателя, который примет Вашу работу.
Все расчеты производить только на обратной стороне листов ответа!